骨骼肌特异性腺相关病毒(AAV)载体介导的VEGF联合IGF-1通过颞肌途径治疗脑缺血的研究

来源 :武汉大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:laotzu123
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目的:本研究通过构建骨骼肌特异性载体介导VEGF联合IGF-1通过颞肌途径治疗脑缺血小鼠。方法:用分子生物学手段构建AAV6-tMCK-GFP、AAV6-tMCK-VEGF以及AAV6-tMCK-IGF-1,在体外用AAV6-tMCK-IGF-1转染HEK293、HUVEC、C8-S以及C2C12肌小管细胞,验证其特异性表达;用AAV6-tMCK-VEGF和AAV6-tMCK-IGF-1转染牵拉条件为0%,5%,10%和15%四个条件下的小鼠颞肌肌小管细胞,检测载体转染效率。以AAV6-tMCK-GFP、AAV6-tMCKVEGF、AAV6-tMCK-IGF-1以及联合AAV6-tMCK-VEGF和AAV6-tMCK-IGF-1四组不同的治疗方式治疗小鼠慢性缺血模型1月,随后行大脑中动脉闭塞术,对术后蛋白的表达量,新生血管的形成情况以及脑梗死面积进行评估。结果:骨骼肌特异性载体在肌小管细胞中表达GFP蛋白,而在其他细胞中表达量低;AAV6-tMCK-VEGF和AAV6-tMCK-IGF-1能够在受牵拉的肌小管细胞中稳定表达VEGF和IGF-1蛋白;联合AAV6-tMCK-VEGF和AAV6-tMCK-IGF-1通过颞肌贴敷术治疗小鼠脑缺血模型可以显著提高脑内血管密度和大血管数量,减少脑梗死面积。结论:骨骼肌特异性载体能够在颞肌中特异性地表达蛋白,联合应用AAV6-tMCK-VEGF和AAV6-tMCK-IGF-1通过颞肌途径治疗脑缺血能够改善颅内血供,增强神经保护。
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